细胞培养累吗，细胞培养mem
chanong
|培养细胞的完全培养基一般由基础培养基（如MEM）和添加剂（血清和细胞生长因子）组成，并且培养基的成分根据细胞所需的营养物质不断改进，抗生素也是如此。过多使用广谱抗生素会增加细胞耐药性并产生耐药性。一些教师选择在不使用抗生素的情况下培养细胞，以提高实验的准确性。
1. 基础培养基
大多数培养基基于平衡盐溶液(BSS)，并补充有血清浓度的氨基酸、维生素和其他营养物质。生物学中最常见的培养基是Dulbecco 改良培养基——DMEM。 MEM 含有相同的营养成分。但浓度要高2-4倍。在选择特定的细胞培养培养基时，熟悉成分列表并选择适合细胞生长的培养基非常重要。一般来说，1640培养基最常用于悬浮细胞，DMEM最常用于贴壁细胞。
谷氨酸不稳定，在许多细胞培养物中通常用作碳源，因此在某些培养基中它的浓度高于其他氨基酸。 MEM 和F12 都必须用5% CO2 进行平衡。 DMEM 含有较高浓度的NaCO3。培养敏感神经元时，应使用10% CO2 进行平衡。当然，也可以在较低的CO2浓度下使用。这些基础培养基的成分基于对各种细胞系生长的研究，但通常可用于原代培养物并获得令人满意的结果。
原则上，使用HEPES 作为缓冲剂可以缓解需要高浓度CO2 而不是碳酸氢盐的培养环境的限制。其实没那么简单。很明显，溶解的二氧化碳和碳酸氢盐对于细胞的良好生长非常重要。 Leibovitz的L15培养基基于专有的BSS，含有高浓度的氨基酸以提高缓冲能力，并使用半乳糖作为培养基的碳源以防止培养基中乳酸的形成。丙酮酸代谢产生少量溶解的CO2。因此，在L-15培养基中培养的细胞通常需要密封在培养瓶中或在100%空气中培养。
2. 血清
细胞无法在简单的基础培养基上存活。为了使细胞能够增殖并维持生长，必须在特殊类型的细胞培养物中提供特定的营养物质和生长因子。基础培养基中常添加血清，血清的终浓度通常为5-20%。特定用途的血清来源必须凭经验确定，常用的血清类型包括马血清和胎牛血清。胎牛血清富含有丝分裂原，通常用作细胞生长、细胞系和原代培养物的血清。马血清通常用于培养有丝分裂后神经元。
不同批次的精华液含有不同的成分，因此在使用前应测试精华液。大多数试剂供应商都会提供样品，通过选择对您有意义的批号，您一次可以获得一年的血清。
3.抗生素
细胞培养中最常用的抗生素是青霉素（常见浓度为25-100 g/ml）和链霉素（25-100 g/ml）。这两种抗生素经常一起使用。在一些实验室中，它们通常被添加到所有培养基中。庆大霉素（10-100 g/ml）通常具有广谱抗菌活性和溶液稳定性，常用于一般实验室。
4. 培训的维持
培养物必须保存在培养箱中。培养箱可自动混合O2和CO2，快速满足培养基设计要求。空气中的氧气浓度远高于血液或脑脊液中的氧气浓度，高湿度阻碍了培养皿中的培养基的蒸发。将培养皿放在盘子上并保持培养箱中的湿度。湿度通常是通过在盒子底部放置一大盆水来确定的。这种水应经常更换，水容器应经常消毒，以防止霉菌生长。如果培养箱被霉菌孢子严重污染，则很难完全清除污染。如果培养物需要在培养箱中长期保存，则需要使用培养基较少的瓶或皿，并盖紧盖子以防止蒸发，或者使用提供相应比例空气的培养箱。
必须定期检查准确的温度调节，培养箱温度通常设置在37C 或以下。细胞可以长时间忍受低温，但如果温度升至39C，它们会在几小时内死亡。