pma诱导thp-1巨噬细胞的浓度和时间，诱导分化治疗
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|THP-1 分化为巨噬细胞。巨噬细胞是重要的免疫效应细胞，在先天性和适应性免疫反应中发挥重要作用。同时，它也是一种高度异质性的细胞，在局部微环境的影响下，可以被激活成不同的类型，表现出不同的表型和功能。由于巨噬细胞在不同组织环境和生理病理条件下的异质性，巨噬细胞分为两大类：M1型巨噬细胞和M2型巨噬细胞。 THP-1 细胞通常用佛波酯(PMA) 诱导分化为巨噬细胞，然后在存在PMA 的情况下用脂多糖(LPS) (100 ng/mL) 和IFN- (20 ng/mL) 处理。孵育48 小时和将其沿M1 方向极化，并与IL-4 (20ng/mL) 和IL-13 (20ng/mL) 孵育48 小时以诱导M2 方向极化。
最后，将细胞重悬于不含兴奋剂和PMA的无血清RPMI-1640培养基中，并可维持72小时[2]。图1. 巨噬细胞分化为M1 和M2。
PMA诱导THP-1的步骤：离心对数生长期的THP-1细胞，在RPMI-1640培养基中重选，加入PMA，显微镜下计数细胞，测定THP-1细胞密度，进行调整。 5*10^5/mL；使PMA终浓度为100ng/mL，将细胞接种于6孔板中，每孔加入2mL细胞；48小时后，巨噬细胞已成功建立。显微镜。单核细胞THP-1经PMA诱导后，由浮游变为无柄增殖，由圆形变为不规则形，并且体积进一步增大，细胞质疏松，细胞核显着增大，并呈现出众多清晰的细胞器。膜周围可以看到一些突起[3]。
图2. PMA 诱导THP-1 分化为巨噬细胞。
THP-1分化为泡沫细胞THP-1细胞被诱导分化为巨噬细胞后，通过摄入大量脂质而转变为泡沫细胞，这是动脉粥样硬化的原因。 THP-1细胞经PMA诱导为巨噬细胞后，在RPMI-1640培养基中制备氧化修饰的低密度脂蛋白OX-LDL至终浓度80 mg/L，加入到6孔板中。每孔体积为2 mL，干预时间为24小时。油红O染色程序：
吸出每孔中的培养基，用PBS 洗涤3 次，用4% 多聚甲醛在37C 固定30 分钟，用PBS 洗涤两次，并用油红O（1 mL/孔）在37C 孵育20 30 分钟，染色几分钟。立即用PBS 冲洗2-3 次，每次不超过10 秒。单核细胞源性巨噬细胞用OX-LDL诱导24小时后，倒置显微镜下观察发现，巨噬细胞体积进一步增大，细胞膜突触清晰形成，细胞质增大疏松，观察到大量细胞器。很明显它已经形成了。吞咽的脂质呈小滴状可见。油红O染色后，细胞质中可见大量红染物质[4]。
图3. 用OX-LDL 诱导巨噬细胞并用油红O 染色。
参考文献：[1]郭强，应海鹏，李翠玲，等.THP-1细胞诱导分化为M1和M2型巨噬细胞的鉴定[C].第九届全国免疫学学术会议论文集.2014.[2]Serena T , Federica DM, Jieun K, et al. 便利性和生物学意义： 体外极化研究中PMA 分化的THP-1 细胞是否是血源性巨噬细胞的可靠替代品[J]. 药理学前沿， 2018, 9:71-. [3,4] 王永进， 王志平， 石变华等. 单核细胞分化为泡沫细胞过程中IL-1对ACAT-1 mRNA表达的影响[J]. 长治医学院学报， 2008, 22(6) ）:4。